RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)就是要對(duì)它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長(zhǎng)特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。那么我們?cè)谑褂眠^(guò)程中都會(huì)遇到哪些問(wèn)題呢？

　　

　　1、收貨后，細(xì)胞不見(jiàn)了

　　

　　收到細(xì)胞，期待值滿(mǎn)滿(mǎn)地打開(kāi)包裝準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)，但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞！這是因?yàn)镽AW264.7細(xì)胞貼壁較松，快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，可能會(huì)脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。這時(shí)候不用擔(dān)心，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個(gè)小時(shí)就可以看到了。如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請(qǐng)將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會(huì)一個(gè)細(xì)胞都找不著。這個(gè)時(shí)候離心驗(yàn)證是理想方法。

　　

　　2、收貨處理后，細(xì)胞不貼壁

　　

　　將細(xì)胞離心收集，用新鮮的RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶里之后，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。RAW264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時(shí)細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。

　　

　　正確的傳代方法是RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)基的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。RAW264.7細(xì)胞不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。普諾賽在RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)這十幾年里，摸索出一個(gè)更不錯(cuò)的方法：吹打傳代。吹打傳代操作簡(jiǎn)單，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的新手們更友好，也能更好地控制細(xì)胞分化率。