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細(xì)胞計數(shù)是實(shí)驗(yàn)室中常見的一項(xiàng)操作，用于確定樣品中細(xì)胞的數(shù)量，判斷細(xì)胞數(shù)量是否滿足實(shí)驗(yàn)需求。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了幾種常見的計數(shù)方法：人工手動計數(shù)法、自動細(xì)胞計數(shù)儀法，以及懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞在不同密度下的鏡下視野的參考范圍，幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
人工手動計數(shù)法
即通過肉眼觀察顯微鏡視野中的細(xì)胞數(shù)量，從而進(jìn)行統(tǒng)計。
操作步驟
1
將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上；
2
輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞均勻分布；吸出10μL-20μL左右的細(xì)胞懸液滴在蓋片邊緣，使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間；
3
靜置1min-2min，使細(xì)胞沉降；注意蓋玻片下不要有氣泡，也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中；
4
在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞（如左側(cè)和上方）；若鏡下有2個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，則應(yīng)按單個細(xì)胞計算；若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多，占細(xì)胞總量的10%左右，則說明細(xì)胞分散不好會導(dǎo)致計算不準(zhǔn)確，需要重新制備細(xì)胞懸液，細(xì)胞量較多的時候，需要借助計數(shù)器；
5
按公式計數(shù)細(xì)胞數(shù)量：細(xì)胞數(shù)/mL=四個大格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)（每個大格共計16個小格）×104/4。
自動細(xì)胞計數(shù)儀法
即通過儀器進(jìn)行計數(shù)，例如血細(xì)胞計數(shù)儀或顯微鏡配備的圖像分析系統(tǒng)。這些設(shè)備能夠自動識別和計數(shù)細(xì)胞，提高計數(shù)的準(zhǔn)確性和效率。
操作步驟
1
將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上；
2
輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞均勻分布；吸出少許細(xì)胞懸液滴在蓋片邊緣，使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間；
3
靜置1min-2min，使細(xì)胞沉降；注意蓋玻片下不要有氣泡，也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中；
4
將計數(shù)板放置在儀器中，按要求設(shè)置參數(shù)，儀器自動計數(shù)；
基于鏡下密度估計細(xì)胞密度
在實(shí)際細(xì)胞培養(yǎng)過程中，若沒有計數(shù)條件或者對于細(xì)胞數(shù)量不要求定量，也可基于肉眼去觀察鏡下的細(xì)胞密度去估計細(xì)胞是否可以傳代。以下是懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞不同密度下的鏡下視野可以給大家作為參考。（需要注意的是，不同大小的細(xì)胞，密度值是有差異的，這里列舉的是較常見的例子）
01 貼壁細(xì)胞的密度參考
顯微鏡下不同密度的貼壁細(xì)胞
02 懸浮細(xì)胞的密度參考
懸浮細(xì)胞接種到T25的瓶子里混勻后，在顯微鏡下靜置3min-5min后，拍照得到：（懸浮細(xì)胞在移動的時候，細(xì)胞會像向中間移動，導(dǎo)致密度不均）
K562細(xì)胞混勻靜置3~5分鐘后拍照（100X拍攝）
K562細(xì)胞混勻靜置3~5分鐘后拍照（200X拍攝）
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